Fractionation of a population ofSaccharomyces cerevisiae yeasts by centrifugation in a dextran gradient

Abstract

A method of the fractionation of aSaccharomyces cerevisiae yeast population in dextran gradients is described. The elaboration of this method was based on the finding of a correlation between the size of individual cells and the number of bud scars on their surface and rapid indication of the scars by fluorescence microscopy. The basic conditions for fractionation (determined experimentally) were as follows: 2 ml. yeast suspension (100 mg. dry weight) was applied to the surface of a continuous dextran gradient of 9–16% concentration and was centrifuged at a relative centrifugal force of 200 G for 15 minutes. In fractionation of a whole population, the best fractionation was obtained in a linear gradient. Repeated separation of fractions obtained by centrifugation in a linear gradient in a concave gradient further separated cells without bud scars and accumulated cells with five scars and over. Three fractions were obtained by this technique. The first contained 90–98% cells without bud scars, the second 55–65% cells with 1–4 bud scars and the third 50% cells with five bud scars and over.

Abstract

Описан метод фракционирования популяции дрожжей Saccharomyces cerevisiae в декстрановых градиентах. Основной предпосылкой для разработки этого метода было обнаружение отношения между размерами отдельных клеток и количеством материнских шрамов на их поверхности, а также способ быстрой индикации шрамов с помощью флуоресцентной микроскопии. Экспериментально были установлены следующие основные условия для фракционирования: суспензию дрожжей (100 мг сухого вещества) в 2 мл вносили в горизонт декстрана с концентрацией, постепенно и непрерывно повышающейся от 9 до 16%, и центрифугировали 15 мин. при относительной центробежной силе 200 G. При центрифугировании всей популяции наиболее успешное фракционирование было получено в линейном градиенте. Путем дальнейшего разделения фракций, полученных в резулятате центрифугирования в линейном градиенте, с применением вогнутого градиента удалось отделить еще клетки без материнских шрамов и скопления клеток с 5 и более шрамами. Так были получены 3 фракции: первая содержала 90–98% клеток без материнских шрамов, вторая— 55–65% клеток c 1–4 материнскими шрамами, а третья—50% клеток с 5 и более материнскими шрамами.